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全自动标本处理系统在临床微生物检验中的应用
作者:网站采编关键词:
摘要：临床微生物实验室主要依靠手工接种的方法进行标本前处理，手工方法的局限性在于因检验人员技术水平难以统一，标本处理很难实现标准化操作，不利于尿培养的后续实验及结果解释
临床微生物实验室主要依靠手工接种的方法进行标本前处理，手工方法的局限性在于因检验人员技术水平难以统一，标本处理很难实现标准化操作，不利于尿培养的后续实验及结果解释。临床微生物检验最大的制约因素还是在质量控制和标准化方面。在国内，最早在2006年被引入使用的是意大利Diesse公司的Robobact自动接种培养系统，仅有3家医院相继使用并报道了仪器的性能[1-3]。直到近几年，全自动微生物标本处理系统以其工作高效性在国内迅速受到关注[4-7]。目前，全球微生物流水线系统只有美国BD公司和意大利Copan公司提供，梅里埃公司只有1台Isola单机版的自动化接种仪，且其已经正式宣布退出在临床微生物自动化流水线设备上的研发和投入。2015年，BD Kiestra InoqulA作为在中国的第1台全自动标本处理系统在广州医科大学附属第三医院实验室投入使用，国内尚未有关于BD Kiestra InoqulA应用的报道。为此，本研究通过观察仪器接种分离到的单个菌落数、菌种数、总的菌落计数和阳性率，并与手工方法比对，进而对BD Kiestra InoqulA性能进行评价，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2019年10-11月广州医科大学附属第三医院各临床科室送检的“中段尿培养、菌落计数”标本810例和“需氧+厌氧培养”的血/无菌体液阳性标本120例(瓶)。所有标本按照本实验室标本采集手册要求留取。
1.2 方法
1.2.1仪器与试剂
BD Kiestra InoqulA全自动标本处理系统、BACTEC FX血培养仪、比浊仪(美国BD公司)，MALDI-TOF MS质谱仪(德国Bruker公司)，CO2培养箱(香港立康)，加样枪(德国Eppendorf公司)；真空含防腐剂尿管、血培养瓶(美国BD公司)，一次性10 μL定量接种环(英国MWE公司)，9 cm血琼脂平板(江门凯林贸易有限公司)；α-氰基-4羟基肉桂酸(HCCA，美国Sigma-Aldrich公司)，接种培养液(美国BD公司)。
1.2.2质控菌株
大肠埃希菌ATCC(随广东省临床检验中心室间质评标本附送)。
1.2.3尿标本接种
将当天送检的尿标本先上机接种(Z字划线)，再进行手工接种。手工接种：将尿标本颠倒混匀，开盖，用10 μL定量接种环垂直浸入尿液标本表面下3～5 mm，将标本吸至环中；在血琼脂平板上划十字，再进行密集均匀涂布。
1.2.4血/无菌体液培养阳性标本接种
75%乙醇消毒阳性培养瓶瓶口，颠倒培养瓶混匀菌液，用2 mL无菌注射器抽取2 mL菌液打入BD真空尿管里，先上机接种(四区划线)，再进行手工接种。手工接种：吸取标本方法同尿接种，在血琼脂平板第一区密集均匀涂布，四区划线。
1.2.5培养及结果观察
标本接种后，把血琼脂平板放入5% CO2培养箱培养18～24 h，如遇菌落生长不良的标本培养48 h，观察菌落生长情况。930例标本皆进行仪器和手工接种比对，记录平板上可计数的单个菌落数、菌落总数(换算为cfu/mL)和菌种数。
MS菌种鉴定
对怀疑两种或以上菌落生长的标本，作质谱鉴定，以确认菌种数。用牙签挑取单个菌落，均匀点涂到靶板上；吸取1 μL 70%甲酸涂敷到标本上；吸取1 μL HCCA基质液涂敷到标本上，待干燥后上机。
1.2.7质量控制及交叉污染试验
将ATCC用接种培养液制备0.5麦氏浊度的细菌混悬液，用加样枪吸取10 μL加到BD真空尿管里，再加2 mL接种培养液稀释200倍作为阳性质控，放置在仪器标本架的1号位；用无菌注射器抽取2 mL接种培养液打入BD真空尿管里，制作9管，作为阴性质控，放置在仪器标本架的2～10号位。
1.3 统计学处理
采用SPSS19.0软件进行数据分析，计量资料以表示，比较采用配对样本t检验；计数资料以频数或百分率表示，比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 质控及交叉污染试验结果
阳性质控经仪器接种后，培养24 h为阳性结果，质谱鉴定为大肠埃希菌。其余9个阴性质控均未培养出细菌。
2.2 两种接种方法的单个菌落分离效果比较
930例标本中20例出现两种接种方法“阴阳不符”的情况。在未能确认是操作污染、接种能力等因素所致的情况下，只选取两种接种方法均阳性的标本进行单个菌落分离效果的比较。无论是尿液还是血/无菌体液标本，经仪器接种比手工接种分离得到更多的单个菌落，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1、图1。
A:仪器法Z字划线(尿)；B:手工法密集涂布(尿)；C:仪器法四区划线(血)；D:手工法四区划线(血)。图1 两种接种方法单个菌落的生长情况
文章来源：《自动化与仪器仪表》 网址: http://www.zdhyyqybzz.cn/qikandaodu/2021/0718/846.html
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